光学显微镜的几种检测方法主要包括以下几种:
1. 明视野观察法(Bright-Field Microscopy)
原理:这是自显微镜发明以来Z传统、Z普遍的应用方法。在明视野观察中,照明光线直接穿过被观察的物体,形成明暗对比的图像。
基本部件:任何物镜和配有孔径光阑的聚光镜均可使用。
适用范围:所有已染色的组织切片、血液涂片等。
注意事项:确保库勒照明系统调整良好,视场光阑不可任意开大,并避免用聚光镜的孔径光阑来调节视野的亮度,否则会影响分辨率。
2. 暗视野观察法(Dark-Field Microscopy)
原理:不直接观察到照明的光线,而是观察到被检物体反射或衍射的光线。视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的像。
特殊附件:需要暗视野聚光镜,使光线斜射向被检物体。
分辨率:远高于明视野观察,Z高可达0.02-0.004mm。
适用范围:观察微生物、细菌、细胞器等微小粒子。
3. 相差观察法(Phase-Contrast Microscopy)
原理:利用被检物体的光程之差进行镜检,有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差。
基本部件:相差物镜、明视野与相差兼用的多用途聚光镜、对中望远镜、绿色滤光片。
适用范围:观察透明、未染色或不能染色的样品,如各种细胞、活组织等。
4. 微分干涉相衬法(Differential Interference Contrast, DIC)
原理:利用双光束干涉的原理,使样品细节呈现出浮雕效果,克服了相差法观察时样品细节像周围伴随有光晕的局限性。
特殊部件:起偏器、检偏器、DIC插片。
适用范围:透明或不能染色的组织切片,厚度可达100μm左右,培养中的活组织和活细胞等。
5. 荧光观察法(Fluorescence Microscopy)
原理:使用荧光染料或转染技术,将荧光团结合到目标组织或细胞器等结构上,再用荧光显微镜激发观察,实现高特异性、高灵敏度观察。
基本部件:荧光光源、激发块(荧光臂或荧光模块)。
适用范围:生物学研究(如细胞和亚微观细胞结构、细胞生理等)、医疗诊断(如原位荧光杂交技术检测癌症、呼吸道病毒检测等)、产业应用(如材料成分检测、药品检测等)。
6. 偏光观察法(Polarizing Microscopy)
原理:将普通光改变为偏光进行镜检,以鉴别某一物质是单折射(各向同性)或双折射性(各向异性)。
应用:广泛应用于矿物、化学、生物学和植物学等领域,用于观察具有双折射性的物质。
7. 体视显微镜观察法(Stereoscopic Microscopy)
特点:具有正象立体感,被广泛地应用于生物学、医学、农林、工业及海洋生物各部门。
应用:适用于需要立体观察的场合,如生物样本的解剖、观察等。
这些检测方法各有特点,适用于不同的观察需求和样品类型。在实际应用中,应根据具体情况选择合适的检测方法。