光学显微镜作为利用可见光进行成像的精密仪器，对样品的要求需围绕其成像原理和观察需求展开，具体涵盖以下方面：
一、光学特性适配性
透明度与透光性
样品需允许可见光穿透，或通过特殊处理（如切片、减薄）实现透光。例如：
生物组织需切成薄片（通常5-20微米），避免光线被完全吸收或散射；
金属等不透明材料需通过抛光至镜面状态，利用反射光模式观察表面形貌，或通过电解抛光等手段制备透光薄片。
颜色与对比度
样品颜色需与背景形成差异，或通过染色增强对比度。例如：
细胞观察中常用苏木精-伊红染色区分细胞核与细胞质；
透明材料（如塑料）可通过添加荧光染料或干涉膜提高可见性。
折射率匹配
样品与周围介质（如浸油、水）的折射率需接近，以减少光线折射导致的图像失真。例如：
高倍物镜观察时需使用浸油（折射率≈1.5）填充样品与镜头间隙；
活体细胞观察常采用水浸物镜以匹配细胞培养液的折射率。
二、尺寸与形状规范
厚度限制
透射光观察的样品厚度需小于物镜的工作距离（通常0.1-10毫米），避免光线无法穿透。例如：
植物叶片需剥离上表皮或使用双面刀片切取薄层；
矿物颗粒需研磨至粉末状并分散在载玻片上。
平面度要求
样品表面需平整，避免因凹凸不平导致局部离焦。例如：
金属试样需通过机械抛光消除划痕；
半导体晶圆需化学机械抛光（CMP）达到原子级平整度。
边缘处理
样品边缘需光滑，避免锐利边角划伤载玻片或物镜。例如：
玻璃碎片需用磨轮倒角；
生物组织切片需用封片剂包裹边缘防止卷曲。
三、表面状态与清洁度
污染控制
样品表面需无指纹、油污、灰尘等污染物，避免光线散射或吸收。例如：
金属样品需用丙酮超声清洗；
光学元件需在超净间内用无尘布擦拭。
氧化层处理
金属样品表面氧化层需通过酸洗、电解抛光等方法去除，或保留作为观察对象。例如：
铝合金需用硝酸溶液去除自然氧化膜；
钢铁热处理组织观察需保留淬火形成的马氏体层。
生物活性保持
活体样品需维持生理环境，避免脱水或变质。例如：
细胞观察需使用含血清的培养液；
组织切片需用多聚甲醛固定并低温保存。
四、制备工艺兼容性
切片技术
生物组织需通过石蜡包埋、冷冻切片等方法制备薄片，矿物需用金刚石线锯切割。例如：
脑组织切片需经脱水、透明、浸蜡等步骤；
钻石需用激光切割并抛光至镜面。
染色与标记
样品需通过染色或荧光标记突出目标结构。例如：
DNA观察需用DAPI染色；
蛋白质定位需用免疫荧光标记。
导电处理（反射光模式）
非导电样品（如陶瓷、塑料）需喷镀金、碳等导电膜，避免电子束充电效应。例如：
聚合物需用溅射仪镀10纳米厚金层；
陶瓷需用石墨涂层增强导电性。
五、环境适应性要求
温度稳定性
样品需在观察过程中保持形态稳定，避免热胀冷缩导致变形。例如：
高分子材料需在恒温箱中平衡至室温；
金属热疲劳观察需控制加热速率。
湿度控制
吸湿性样品需在干燥环境中制备和观察，避免水汽干扰。例如：
盐类晶体需在干燥皿中保存；
纸张纤维观察需用硅胶干燥剂除湿。
光照耐受性
光敏样品需避免长时间曝光导致褪色或分解。例如：
荧光染料需用遮光载玻片封装；
感光乳剂需在暗室中处理。
六、操作安全与规范
毒性控制
有毒样品（如重金属化合物、放射性物质）需在通风橱内处理，并佩戴防护装备。例如：
砷化物需用聚乙烯手套操作；
铀矿石需在铅玻璃屏蔽下观察。
生物安全
病原微生物样品需在生物安全柜内操作，并遵循灭菌程序。例如：
病毒颗粒需用戊二醛固定；
细菌涂片需火焰灭菌。
废弃物处理
化学废液、尖锐物等需分类收集并交由专业机构处理。例如：
含铬废液需中和后排放；
盖玻片需用碎纸机破碎后回收。
