光学显微镜的观察方式中，荧光观察是一种重要且广泛应用的技术。以下是对荧光观察方式的详细介绍：
一、荧光现象
荧光是一种光致发光现象，指的是某些分子在吸收特定波长的光线（激发光）后，能够再发射出其他波长的光线（发射光）。这种分子被称为荧光团，其激发光谱和发射光谱之间存在差值，发射光能量比激发光低，波长比激发光长，这个差值称为“斯托克斯位移”。荧光现象包括自发荧光与继发荧光两种：
自发荧光：是指样品自带荧光团，经照射后就能发出荧光，如叶绿体。
继发荧光：也称二次荧光，样品经照射后不能发出荧光，需先用荧光染料标记处理，再经照射才能发生荧光。荧光显微镜主要利用的是继发荧光。
二、成像原理
某些分子能吸收特定波长的光线，然后再发射出更长波长的光线。光谱波长从短到长，颜色分别是“紫外-紫-蓝-绿-黄/橙-红-红外”，短波长激发可以激发长波长发射，比如紫外激发蓝色发射，蓝光激发绿色发射。在荧光显微镜中，通常使用荧光染料或转染技术，将荧光团结合到目标组织或细胞器等结构上，再用荧光显微镜激发观察，从而实现高特异性、高灵敏度观察。
三、荧光显微镜的关键部件
荧光显微镜是利用荧光特性进行观察、成像的光学显微镜，其构造主要包括以下几个关键部件：
荧光光源：用于提供荧光激发光，核心规格是光谱特征波长，要求能覆盖染料的激发特征波长，并提供足够光强。常用的荧光光源有汞灯、氙灯、金属卤素灯以及LED荧光光源。其中，LED荧光光源在开关性能、使用寿命、光强可控性和免维护等方面具有显著优势。
荧光激发块：一组激发块由激发滤光片、发射滤光片和二向分光镜组成。激发滤光片只让特定波长激发光通过，用以激发特定荧光染料；发射滤光片匹配荧光染料特性，只让特定波长的发射荧光通过；二向分光镜反射激发波段的光，透过发射波段的光。激发块的作用是筛选特定的激发光和发射光，透过目标荧光信号。其核心规格是光谱波长参数，其波长参数与荧光染料匹配度会极大影响荧光观察效果，匹配不佳会带来更多背景杂讯、更低的信噪比。
荧光臂/荧光模块：用来安装荧光光源和激发块的载体，核心规格是通道数和光源接口，影响配件适配和扩展性。此外，荧光显微镜还可能配备有外置快速转轮等部件，以实现高速多色实验。
四、荧光观察的成像特点
荧光观察成像特征是暗背景和荧光色的目标信号，这带来了以下应用优势：
高特异性和高灵敏度：可以特异性标记微小的细胞结构、分子、基因、蛋白、化合药物等。
多通道检测：可标记多种染料用于指示不同部位实现多通道成像，适合研究复杂生物系统的相互作用。
适用范围广：可实现活体、离体、标记、自发等多种方式的荧光成像，对样本限制较少。
五、荧光观察方式的主要应用
荧光显微镜广泛应用于细胞生物学、神经生物学、植物学、微生物学、病理学、遗传学以及医疗诊断、产业应用等领域。
生物学研究：借助荧光染料标记，荧光显微镜可准确而详细地识别细胞和亚微观细胞成分和活动，如细胞和亚微观细胞结构、细胞生理、动物生理病理等。
医疗诊断：荧光显微镜可用于原位荧光杂交技术（FISH）检测癌症、呼吸道病毒检测、真菌镜检等。
产业应用：在材料科学领域，荧光显微镜可用于检测矿物、纺织、纸张等材料的成分；在药品检测方面也有重要应用。
综上所述，荧光观察方式作为光学显微镜的一种重要观察手段，具有广泛的应用前景和重要的研究价值。
